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Selon la différence dans la détermination des antigènes et des anticorps, il y a beaucoup de modes automatiques de mesure d'ELISA, tels que la méthode directe, la méthode indirecte, la méthode de sandwich à double anticorps (directe, indirecte), la méthode concurrentielle d'inhibition (directe, sandwich, etc.), la méthode de capture, etc. dans les laboratoires cliniques, Les modes de mesure ELISA couramment utilisés comprennent la méthode en sandwich à double anticorps, la méthode indirecte, la méthode en sandwich à double antigène, la méthode d'inhibition compétitive et la méthode de capture.

Dans la détermination des antigènes, le mode le plus couramment utilisé pour la détermination des antigènes de macromolécules protéiques est la méthode en sandwich à double anticorps. Pour les petites molécules avec un seul épitope, une méthode d'inhibition compétitive est utilisée; la détermination des anticorps utilise généralement une méthode indirecte, une méthode sandwich à double antigène, une méthode d'inhibition compétitive et une méthode de capture.

1. méthode de sandwich à double anticorps du poste de travail ELISA

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the Poste de travail ELISA uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" Kit d'essai médical.

À l'heure actuelle, dans notre laboratoire clinique, la détermination des antigènes macromoléculaires tels que HBsAg, alpha-foetoprotéine (α-foetoprotéine, αFP), antigène spécifique de la prostate (PSA), marqueurs de la série CA, hCG et hormones, etc. utilisent essentiellement une méthode en une seule étape. Par rapport à la méthode en deux étapes, la méthode en une étape est simple à utiliser, mais a ses défauts inhérents. S'il n'est pas bien manipulé, les résultats d'immunoessai de sandwich de double-anticorps seront faux négatifs ou bas des résultats quantitatifs dus à l'existence de l'effet de crochet.

2. essai de droit concurrentiel du poste de travail d'ELISA

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The Poste de travail ELISA can only use the competitive inhibition method.

Dans ce mode de dosage, une combinaison de petites molécules et d'enzymes doit être obtenue. La préparation de conjugués enzymatiques à petites molécules n'est pas aussi simple que celle des conjugués d'enzymes d'anticorps, et sa purification est également assez difficile. La différence de poids moléculaire entre l'enzyme liée à la petite molécule et l'enzyme libre est faible, et il est difficile de séparer en utilisant des méthodes générales de tamis moléculaire. Par conséquent, certaines personnes essaient d'établir une méthode ELISA de compétition en sandwich à double anticorps pour la détermination de petites molécules basée sur la synthèse de petites molécules di-ou multimères. La sensibilité et la spécificité de la détermination ont été améliorées.

3. Méthode indirecte de détermination des anticorps dans le poste de travail ELISA

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the Kit de test d'anticorps. Avant qu'il ne soit difficile d'obtenir des antigènes de haute pureté et bien définis, ou lorsque les antigènes sont plus compliqués, la méthode indirecte est généralement utilisée.

De nos jours, les éléments de test clinique couramment utilisés de l'anticorps du virus de l'hépatite C (anti-VHC) sont tous des méthodes indirectes, et la méthode indirecte est utilisée pour détecter les anticorps. Strictement parlant, seule la classe d'anticorps IgG est mesurée, et les classes IgM et IgA ne sont pas impliquées. Ceci est déterminé par l'anticorps secondaire marqué par une enzyme. À l'heure actuelle, certains kits de détection d'anticorps IgⅢ spécifiques adoptent la méthode indirecte.

4. méthode de sandwich à double antigène de poste de travail d'ELISA

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the Poste de travail ELISA has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. Droit de la concurrence du poste de travail ELISA

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the Poste de travail ELISA can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).