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Ⅰ. Le principe de la technologie PCR

Cette année, la COVID-19 fait rage dans le monde entier et tout le monde doit avoir entendu parler des tests d'acides nucléiques. Dans la détection d'acide nucléique de l'épidémie, la technologie de fluorescence PCR joue un rôle central, ce qui peut aider les inspecteurs à déterminer rapidement et précisément s'ils sont infectés par le COVID-19.

En quoi consiste exactement la technologie PCR?

PCR est l'acronyme de Polymerase Chain Reaction. En bref, la PCR consiste en trois étapes de réaction de base: dénaturation à haute température-recuit à basse température-extension à moyenne température:

1. dénaturation de l'ADN pour devenir monocaténaire

Après que l'ADN matrice est chauffé à environ 95 ° C pendant une certaine période de temps, le double brin de l'ADN matrice est dissocié en un seul brin afin qu'il puisse se lier à l'amorce et se préparer pour la prochaine série de réaction.

2. recuit à basse température

Après que l'ADN matrice est dénaturé en brins simples, la température est abaissée à environ 55 °C, et les amorces sont appariées avec les séquences complémentaires des brins simples d'ADN matrice.

3. extension de température moyenne

Sous l'action de l'enzyme Taq, la matrice d'ADN et les conjugués d'amorce utilisent le dNTP comme matière première de réaction et la séquence cible comme matrice, selon le principe de l'appariement des bases et de la réplication semi-réservée, et synthétisent enfin une nouvelle chaîne de réplication semi-réservée complémentaire à la chaîne d'ADN modèle.

Ⅱ. Méthodes de détection de PCR fluorescente

À l'heure actuelle, la plupart des réactifs de détection de COVID-19 approuvés par la State Drug Administration de la Chine utilisent des méthodes PCR fluorescentes pour détecter COVID-19.

La méthode PCR fluorescente fait référence à l'ajout de groupes fluorescents au système de réaction PCR. Avec les progrès de l'amplification par PCR, les produits de réaction continuent à s'accumuler et l'intensité du signal de fluorescence augmente également proportionnellement. Graphique de courbe d'amplification de fluorescence, détection en temps réel du processus de fluorescence PCR.

Ⅲ. Principes de sélection des consommables fluorescents PCR

1. Matériel

La PCR est généralement faite de matériau PP, car les consommables PCR/qPCR sont généralement en contact direct avec des réactifs ou des échantillons, tandis que le polypropylène (PP) est un matériau biologiquement inerte, la surface n'est pas facile d'adhérer aux biomolécules, et a une bonne résistance chimique et température. Tolérance (peut être autoclavé à 121 °C et peut également résister aux changements de température pendant le cycle thermique). Les consommables PCR sont tous des matériaux PP.

Tube 2. PCR/volume de la plaque

Comment choisir des tubes/plaques PCR de différents volumes?

But de sélection: sélectionnez le produit approprié en fonction des exigences expérimentales spécifiques. Le volume des tubes PCR peut principalement répondre aux exigences des réactions PCR. Les tubes PCR sont idéaux pour les expériences PCR/qPCR à faible et moyen débit, les tubes simples et les bandes étant les deux formats les plus couramment utilisés.

Un seul tube offre la flexibilité de définir le nombre exact de réactions à exécuter. Alternativement, un seul tube de 0,5 mL peut être sélectionné pour des volumes de réaction plus importants.

Les accouplements sont habituellement disponibles dans le format de 8 ou de 12 tubes avec distinct ou avec des chapeaux. Compatible avec les pipettes monocanales et multicanaux pour les expériences à faible et moyen débit. Les bandes avec les chapeaux ouvrent et ferment des tubes témoin indépendamment pour empêcher la contamination d'échantillon.

3. Épaisseur de paroi

L'épaisseur de la paroi du tube affecte directement la conductivité thermique, et les épaisseurs de paroi extrêmement minces optimisent le transfert de chaleur et réduisent le temps de cycle. Le plastique à paroi ultra-mince est environ 50% plus mince que la version standard, réduisant encore la barrière thermique, ce qui entraîne une réponse plus rapide et plus robuste. Les consommables PCR sont tous des parois de tubes ultra-minces.

4. Couleur

Les plaques PCR sont souvent disponibles dans une variété de formats de couleurs différents pour faciliter la différenciation visuelle et l'identification des échantillons, en particulier dans les expériences à haut débit. Pour les réactions PCR ordinaires, il est possible d'utiliser des tubes PCR transparents ou colorés, et les tubes PCR transparents sont plus utiles pour la gestion de la classification des échantillons.

Bien que la couleur du plastique n'ait aucun effet sur l'amplification de l'ADN, les consommables PCR blancs de haute qualité sont recommandés pour la qPCR. Comme la qPCR nécessite une détection quantitative en temps réel de l'intensité du signal de fluorescence, une transmission sensible et précise du signal de fluorescence est nécessaire. Des expériences ont montré que, par rapport aux produits PCR transparents traditionnels, les produits PCR blancs peuvent refléter le signal fluorescent dans toute la mesure du possible, réduire la contamination croisée des signaux spatiaux et obtenir les résultats de la PCR quantitative par fluorescence en temps réel.

Différentes marques d'instruments, en raison de la conception de position différente du détecteur de fluorescence, veuillez vous référer aux matériaux recommandés par le fabricant. Pour l'instrument PCR en temps réel Bio-Rad CFX ou Roche 480, le fabricant recommande l'utilisation de plaques PCR blanches. Parce que la plaque de PCR est blanche ou transparente, et a diverses spécifications, il convient aux instruments PCR courants sur le marché.